Türkiye Kupası play-off aşamasında 2. kademe maçları sonucu tur atlayan 18 takım, 2008-09 sezonunda Turkcell Süper Ligi 5-15 arasında tamamlayan 11 takım ve Turkcell Süper Lig'e yükselen 3 takım tek maçlı eleminasyon sistemine göre mücadele edecek.

2. Kademede Tur Atlayan 18 Takım

Adanaspor
Altay
Belediye Vanspor
Çaykur Rizespor
Denizli Belediyespor
Giresunspor
Güngören Belediyespor
Karşıyaka
Kastamonuspor
Kayseri Erciyesspor
Konya Şekerspor
Mersin İdmanyurdu
Orduspor
Tarsus İdmanyurdu
Tokatspor
Yalovaspor

Play-off'a direk katılacak 14 takım

Ankaraspor
Antalyaspor
Bursaspor
Büyükşehir Belediyespor
Denizlispor
Diyarbakırspor
Eskişehirspor
Galatasaray
Gaziantepspor
Gençlerbirliği
Kayserispor
Kasımpaşa
Ankaragücü
Manisaspor